饲料酵母粉质量鉴定与酵母细胞数的测定方法研究

饲料酵母粉质量鉴定与酵母细胞数的测定方法研究

    营养部 饲料质检中心  钟彩英  冯建文  陈丽

    （广东温氏食品集团有限公司，  广东新兴  527439）

摘要：本文研究了饲料酵母粉质量鉴定与酵母细胞数的检测方法

关键词：酵母粉  质量鉴定  细胞数

饲料酵母作为蛋白质饲料资源,已被广泛应用。酵母属单细胞蛋白和植物性蛋白,其蛋白质的生物学价值较高,介于动物性蛋白和动物性蛋白之间,特点是以活性蛋白质形式在饲料中起活化和平衡营养的作用。随着社会需求量的增加,市场上出现以植物或动物蛋白粉冒充饲料酵母的假冒产品,使用户受到蒙骗和经济损失。而只检测饲料酵母粉的粗蛋白质、真蛋白质、水份、灰分、色泽等营养成份作依据，自然是不够充分的。作为饲料质量把关部门建立酵母粉酵母细胞数的测定方法，对酵母粉的质量评定，具有十分重要意义。

1、酵母细胞数与饲料酵母粉质量的关系

酵母细胞数，在酵母粉中是指1g样品所含酵母细胞个数，在发酵液中指1ml样品中所含酵母细胞个数，酵母细胞数测定可有效鉴别真假饲料酵母。但在检测酵母粉时，酵母细胞数不一定越多越好。必须对酵母形态、大小和细胞数重量进行测定，才能准确反映出酵母的质量。

  酵母细胞形态、大小可用显微镜进行观察和测量。酵母细胞单重难以测定，但可以比较。在众多纯酵母产品中，啤酒饲料酵母因为用营养丰富的麦芽汁培养，所以细胞形态最好，细胞没有空泡，个体最大、最重。药用酵母细胞形态较好，个体为啤酒1/2?2/3,有一点空泡,个性重量不如啤酒酵母.废液发酵饲料酵母个体比药用酵母略小,空泡也大一些,细胞重量不如药用酵母,而固体发酵酵母产品因培养酵母时增养基营养不足,其细胞形态不均匀,个体最小,空泡大,重量最轻。上述酵母细胞大小、重量顺序为：啤酒酵母 > 药用酵母 > 废液发酵 > 固体发酵酵母。这样，各种纯正酵母在相同重量下，废液发酵酵母粉细胞数最多，药用酵母次之，啤酒酵母粉最少，可见，不能仅比较酵母细胞数就认为酵母数最多的酵母粉就是最好的。这里需要比出，用显微镜对酵母细胞数检测酵母细胞数的同时可观察细胞形态、大小，因此可估计酵母生产的菌种和工艺水平。

2、酵母细胞数的测定方法

1）原理

将样品制成分散的酵母细胞均匀悬液，用血球计数板在显微镜下直接计数法，测定出数室内的酵母细胞数，再根据计数室内的体积，计算出该样品的细胞数。

注：本方法适合含细胞10亿/g 以下的饲料酵母粉测定。

2）仪器

a  血球计数板；

b  生物显微镜；

c  分析天平：感量0.1mg；

d  磁力搅拌器。

3）分析步骤

样品经磨碎过40目筛，称取试样0.5---1.0g（称准至0.0002g）,加水稀释至50ml ,加数十粒玻璃珠,于磁力搅拌器搅拌10分钟,用沙布过滤,滤液①。

残渣再加水50ml, 加数十粒玻璃珠,于磁力搅拌器再搅拌10分钟, 用沙布过滤,滤液②,合并滤液①,摇匀, 稀释倍数为100倍（稀释倍数应以血球计数板的每小格内含有1?3个酵母细胞为宜）.

取一干净的血球计数板,将盖玻片置于计数板上用吸管吸取稀释后摇匀的菌液(注意：摇匀后即时取样，预防细胞下沉结果偏低)，加一滴于盖玻片边缘,菌液自行渗入,充满整个计数室.静置1­­­­?2min，使细胞全部沉降至计数板表面，用滤纸吸去计数区两侧凹槽内多余液体，置显微镜下计数。

计数时先用低倍镜找到计数区中间的计数池，再换650倍计数，计数时，计四个角的四个中方格和中央一个中方格（如下图），共5个中方格（80个小方格）的酵母细胞总数。位于中方格线上的细胞，只计上方和右方线上的细胞，细胞繁殖体超过母体1/2时，按一个细胞计数。

           计数室有单线和双线格

只计双线格的酵母细胞数,只

计如图画三角形的中方格

4）计算

                                 A × 4 × D

           每克样品酵母细胞数 = ???????

N × M ×100

注：A???几个小方格内细胞的总数，个

    D???样品的稀释倍数

    N???所数得的小方格数

    M???试样的质量，g

5）结论

用上述方法做的平行实验：同一样品同一操作者5次重复实验结果分别为（亿/g）：

5.54 、5.36 、 5.50 、5.48、5.60，变异系数（CV）为1.61%。

同一样品不同操作者4次对比实验结果分别为（亿/g）：6.76 、6.68、6.55、6.48变异系数（CV）为1.90%。

3、鉴定饲料酵母粉质量的几点建议

1）根据QB/T1940?1994标准对酵母粉进行检测，各行指标均合格后，该产品才称得上饲料酵母粉。

2）如果对酵母粉含氮有怀疑，可对无机氮进行定性、定量分析，有条件的最好用氨基酸分析仪分析各种氨基酸含量。

3）建立酵母粉酵母细胞数的测定方法，用650倍显微镜测定酵母细胞数和酵母细胞形态衡量产品质量。

4）到酵母生产厂家了解生产工艺和设备。真正酵母厂应具备液体发酵罐、酵母分离机、酵母滚筒干燥机或喷雾干燥机等设备。到厂参观的同时，最好该厂干燥设备中取样留作日后进货检测对照，以防掺假。